qpcr引物设计网站，设计qpcr引物的网站

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qpcr引物可以当普通引物用吗？

把PCR的引物用在qPCR里一般来说还是可以的，虽然如果你们实验室跟其他人共用一台仪器，其他等着用的人看到你的程序可能会骂街。但是qPCR引物并不总能用于PCR（或者说有意义的PCR）。因为二者实验目的不同。

PCR的实验目的一般是扩增某一目的片段，某一基因，而qPCR只需要确定是否有，有多少。所以一般的，PCR会扩增比较长的片段，而qPCR一般只会扩增很短的一小段。

pcr过程中加入内参引物的原因？

常说的qpcr，qrt-pcr，都是通过实时（real time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值

但是呢，由于之前rna提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考。

内参的作用，即通过测量内参，可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化。

pcr和qpcr的原理和区别？

RT-PCR和一般的PCR相比原理上没有太多的区别，无非就是在反转时候RNA的定量，不同模板的设定。对引物没有特别的要求，能特异代表目的基因就行。

real-time PCR根据原理的不同，引物选择也不同。通常用的是SYBR Green的方法，这种方法引物在RT-PCR的基础上需要注意：

1.退火温度同内参；

2.片段长度不要超过200； real-time PCR的引物可以跑RT-PCR，反之不一定。

qpcr 退火温度？

1、退火温度低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃。退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值（Tm值=4(G+C) +2(A+T)）为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。

2、延伸时间：1min/kb(10kb内）。引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。扩展资料PCR的过程：1、DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA2、退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

3、延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。

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